PURPOSE: To evaluated the effects of L-arginine (a NO donor) and L-NAME (Nw-nitro-L-arginine methyl ester - a NOS inhibitor) on ischemia-reperfusion in rat livers.METHODS: One hundred fifty two male Wistar rats were divided into four groups: control (simulated surgery); hepatic IR; pretreatment with L-arginine plus hepatic IR; and L-NAME plus hepatic IR. The hepatocellular damage was evaluated at the first, third and seventh days after the procedures through the alanine-aminotransferase (ALT) and aspartate-aminotransaminase (AST) levels, as well as histopathological features: vascular congestion (VC); steatosis (STE); necrosis (NEC); and inflammatory infiltration (INF). The mortality rate was also evaluated.RESULTS: The pretreatment with L-NAME significantly worsened the AST levels after hepatic IR (p<0.05) at first day and L-arginine demonstrated an attenuating effect on ALT levels at seventh day (p<0.05). Furthermore, the administration of L-arginine was able to reduce the VC and STE in the seventh day after hepatic IR (p<0.05). The analysis of the mortality rates did not demonstrate any difference between the groups. Nevertheless, there was not effect of L-arginine and L-NAME on the mortality of the animals.CONCLUSION: L-arginine/NO pathway has a role in the hepatic IR because the pretreatment with L-arginine partially had attenuated the hepatocellular damage induced by hepatic IR in rats.

Racional: O adenocarcinoma gástrico é encontrado mais frequentemente em homens acima de 50 anos sob a forma de lesão antral. A neoplasia apresenta características histopatológicas heterogêneas e prognóstico ruim (sobrevida média de 15% em cinco anos). Objetivo: Estimar a relação entre a presença de metástases nodais e demais fatores prognósticos no adenocarcinoma gástrico esporádico. Método: Foram avaliados 164 casos consecutivos de adenocarcinoma gástrico previamente submetidos à gastrectomia (parcial ou total), sem evidências clínicas de metástase à distância, sendo determinadas as seguintes variáveis: topografia da lesão, tamanho tumoral, configuração macroscópica segundo Borrmann, grau histológico, lesão precoce ou avançada, subtipo histológico segundo Lauren, presença de células em anel de sinete, grau de invasão, status dos linfonodos perigástricos, invasão angiolinfática/perineural e estadiamento. Resultados: Foram encontradas 21 lesões precoces (12,8%) e 143 avançadas (87,2%) com predomínio de lesões T3 (n=99/60,4%) e N1 (n=62/37,8%). O status nodal esteve associado à profundidade de invasão (p<0,001) e tamanho tumoral (p<0,001). O estadiamento esteve relacionado à idade (p=0,048), grau histológico (p=0,003) e presença de células em anel de sinete (p=0,007), invasão angiolinfática (p=0,001) e invasão perineural (p=0,003). Conclusão: No adenocarcinoma gástrico, o envolvimento linfonodal, o tamanho tumoral e a profundidade de invasão são dados histopatológicos associados ao padrão de crescimento/disseminação neoplásico, sugerindo que a dissecção ampla de linfonodos perigástricos seja etapa fundamental no tratamento cirúrgico destes pacientes.

Background: Gastric adenocarcinoma is more often found in men over 50 years in the form of an antral lesion. The tumor has heterogeneous histopathologic features and a poor prognosis (median survival of 15% in five years). Aim: To estimate the relationship between the presence of nodal metastasis and other prognostic factors in sporadic gastric adenocarcinoma. Method: Were evaluated 164 consecutive cases of gastric adenocarcinoma previously undergone gastrectomy (partial or total), without clinical evidence of distant metastasis, and determined the following variables: topography of the lesion, tumor size, Borrmann macroscopic configuration, histological grade, early or advanced lesions, Lauren histological subtype, presence of signet ring cell, degree of invasion, perigastric lymph node status, angiolymphatic/perineural invasion, and staging. Results: Were found 21 early lesions (12.8%) and 143 advanced lesions (87.2%), with a predominance of lesions classified as T3 (n=99/60, 4%) and N1 (n=62/37, 8%). The nodal status was associated with depth of invasion (p<0.001) and tumor size (p<0.001). The staging was related to age (p=0.048), histological grade (p=0.003), and presence of signet ring cells (p = 0.007), angiolymphatic invasion (p = 0.001), and perineural invasion (p=0.003). Conclusion: In gastric cancer, lymph node involvement, tumor size and depth of invasion are histopathological data associated with the pattern of growth/tumor spread, suggesting that a wide dissection of perigastric lymph nodes is a fundamental step in the surgical treatment of these patients.

OBJETIVO: Investigar a permeabilidade placentária em coelhos adultos fêmeas dislipidêmicas e a consequente disfunção vascular em seus fetos. MÉTODOS: Quinze coelhos adultos fêmeas Nova Zelândia Brancas foram distribuídas em grupo dislipidêmico e grupo controle. No trigésimo dia de gestação foram medidos os triglicerídeos e as lipoproteínas nas coelhas e verificada a presença de colágeno na placenta e coronárias fetais. Análise estatística foi feita com teste t de Student´s e Mann-Whitney. RESULTADOS: Os níveis de lipoproteínas foram diferentes estatisticamente entre os grupos (p=0,02 a p<0,001). A quantidade de colágeno por micrômetro quadrado foi significantemente maior no grupo hipercolesterolêmico em comparação ao grupo controle. CONCLUSÕES: O estudo confirmou a permeabilidade placentária para lipoproteínas demonstrando aumento de colágeno nos tecidos fetais. Esta alteração induz ao aumento da suscetibilidade para aterosclerose na vida adulta, representando um fator de risco para desenvolvimento precoce da doença aterosclerótica a qual pode estar presente mesmo no período pré-natal.

PURPOSE: To investigate the degree of placental permeability in dyslipidemic rabbits and the consequent vascular dysfunction in fetuses of female rabbits with high lipoprotein levels. METHODS: Fifteen adult females New Zealand White rabbits were divided into two groups. Group 1(n=5) - hypercholesterolemic diet with 0.5% cholesterol, and Group 2 (n=10) - control. On day 30, the levels of plasma lipoproteins and triglycerides were analyzed in the mothers, and the presence of collagen was analyzed in the placenta as well as in fetal coronary and aorta. Statistical analyses used the Student's t and the Mann-Whitney tests. RESULTS: Lipoprotein levels were significantly different (p=0.02 to p<0.001) in experimental and control groups. In the hypercholesterolemic group, total cholesterol levels were in average 793mg/dl; triglycerides were in average 257mg/dl; HDL-C was 48mg/dl, and LDL-C was in average 692mg/dl. The amount of collagen per micrometers square (mµ²) in samples from hypercholesterolemic animals was significantly higher than in the control group. CONCLUSIONS: The study confirmed placental permeability to lipoproteins, shown by increased amounts of collagen in fetal tissues. This alteration results in increased susceptibility to atherosclerosis in adult life, representing a risk factor for the early development of disease, which may appear even in the prenatal period.

Introdução: O carcinoma colorretal corresponde a uma das neoplasias malignas mais frequentes no Brasil, sendo a terceira causa de óbito em mulheres e a quinta em homens. Determinadas características histopatológicas do tumor, como grau, tamanho e presença de metástases, podem ser correlacionadas com o tempo de sobrevida livre de doença. Objetivo: avaliar a associação entre metástases em linfonodos regionais e características histopatológicas no adenocarcinoma colorretal. Método: Foram avaliados cinqüenta espécimes de colectomia por adenocarcinoma no laboratório de patologia da Ulbra entre 2006 e 2008, sendo determinados os seguintes dados: topografia, tamanho tumoral, configuração macroscópica, grau histológico, borda microscópica, presença de metástases linfonodais e estadiamento (TNM, Dukes e Astler-Coller). Resultados: a idade média correspondeu a 63,7 anos, com predomínio em mulheres (n=26-52%) e no cólon esquerdo / reto (n=29-58%). Não houve associação entre a presença de metástases nodais e idade (p=0,802), sexo (p=0,786), borda microscópica (p=0,180), presença de áreas mucoprodutoras (p=0,860), grau de diferenciação (p=0,068) e tamanho tumoral (p=0,987). Conclusão: No adenocarcinoma colorretal, a presença de metástases em linfonodos não está associada ao tamanho tumoral, bordas microscópicas e grau histológico, sendo necessária a avaliação de novos fatores, possivelmente eventos moleculares, para predizer a presença de metástases nodais.

Introduction: The colorretal carcinoma corresponds to the one of the most frequent malignant neoplasias in Brazil, being the third cause of death for malignant tumors in women and fifth in men. Certain histopathological characteristics of the tumor, as so grade, size and presence of metastases, can be correlated with free long term of disease. Objective: to evaluate the association between metastases in lymph nodes and histopathological data in the colorretal adenocarcinoma. Method: There were evaluated 50 specimens of colectomy for adenocarcinoma between 2006 and 2008, being studied the following data: topography, tumoral size, macroscopic configuration, histological grade, depth of invasion, microscopical edge, presence of metastases in lymph nodes and staging (TNM, Dukes and Astler-Coller systems). Results: the median age was 63,7 years-old, predominantly in women (n=26-52%) and in the left colon/rectum (n=29-58%). There weren´t association between the presence of metastatic lymph nodes with regard to age (p=0,802), sex (p=0,786), microscopic borders (p=0,180), presence of mucinous areas (p=0,860), grade (p=0,068), and size (p=0,987). Conclusion: In the colorretal adenocarcinoma, the presence of nodal metastases is not associated to the size, microscopic borders and grade, been necessary the evaluation of new factors, possibly molecular events, to predict the presence of nodal metastasis.

OBJETIVO: Comparar as medidas cardíacas e a morfometria celular miocárdica dos filhotes de ratas diabéticas (FRD) com filhotes de ratas normais (FRN). MÉTODOS: Foram estudados 30 filhotes de 3 ratas Wistar com diabetes gestacional induzido por 50mg/kg de estreptozotocina, no 11° dia após a concepção. O grupo controle foi de 50 filhotes de 6 ratas Wistar normais. As medidas de comprimento, peso corporal e peso cardíaco foram realizadas com paquímetro e balança e as medidas celulares por analisador computadorizado de imagem. A análise estatística usou o Teste t de Student, ANOVA e teste de Levene. RESULTADOS: A média de peso e comprimento dos filhotes, desde o nascimento até os 21 dias de vida, foi significativamente maior (p<0,001) no grupo dos FRN. O peso, tamanho cardíaco e a proporção cardíaca dos FRD, ao nascimento, foi, significativamente, maior (p<0,001), regredindo ao longo dos 21 dias de vida. Os FRD apresentaram uma regressão significativa da área e perímetro nuclear (p<0,01) do nascimento aos 21 dias de vida, o mesmo não ocorrendo no grupo controle. CONCLUSÕES: Os FRD apresentaram, ao nascimento, maior tamanho cardíaco, maior peso cardíaco e maior proporção peso cardíaco-peso corporal do que FRN, havendo igualdade estatística entre os dois grupos a partir do 11° dia de vida. Houve diferença significativa entre o nascimento e o 21º dia de vida nas medidas celulares demonstrando regressão da hipertrofia miocárdica nos filhotes das ratas diabéticas.

PURPOSE: To compare body weight and length, heart weight and length, heart-to-body weight ratio, glycemia, and morphometric cellular data of offspring of diabetic rats (ODR) and of normal rats (control). METHODS: Diabetes was induced in 3 pregnant Wistar rats, bearing 30 rats, on the 11th day after conception by intraperitoneal injection of 50 mg/kg of streptozotocin. Six normal pregnant Wistar rats, bearing 50 rats, made up the control group. Morphometric data were obtained using a scale for the weight, length, heart and body measurements. Morphometric cellular data were obtained by a computer assisted method applied to the measurements of myocytes. Statistical analysis utilized Student's t-test, ANOVA and Levene test. RESULTS: Control offspring had greater mean body weight and length than offspring of diabetic rats (p < 0.001). Heart weight and length and heart-to-body ratios of newborn rats differed between groups at birth (p < 0.001), but showed no difference at 21 days. Mean nuclei area and perimetric value of the myocytes decrees throughout the first 21 days of life (p < 0.01) in the diabetic group. CONCLUSIONS: Heart hypertrophy on the offspring of diabetic rats at birth was demonstrated by the significant difference between the groups. After the eleventh day, no difference was found, which confirmed regression of cardiomegaly. The significant difference between the first and the 21th day of life, for nuclei area feature, demonstrate regression of cardiac hypertrophy in the offspring of diabetic rats.

OBJETIVO: demonstrar a expressão de biomarcadores, detectados por técnicas de imunohistoquímica, em tecidos sadios, lesões pré-neoplásicas e neoplásicas do colo do útero. MÉTODOS: para avaliação da reatividade imunohistoquímica de tecidos do colo do útero ao p16 e ao herpes simples vírus tipo 2 (HSV-2), foram avaliadas 187 amostras de lesões intra-epiteliais de baixo grau (LIE-BG) e lesões intra-epiteliais de alto grau (LIE-AG) e carcinoma do colo do útero, e comparadas com grupo de pacientes sem lesões no colo uterino. A análise estatística foi realizada pelo teste do chi2 para tendências. O nível de significância foi de alfa=0,05. RESULTADOS: foi avaliada a reatividade ao p16 com a seguinte distribuição: grupo sem lesão no colo do útero: 56% (24/43), LIE-BG: 92% (43/47), LIE-AG: 94% (43/46) e câncer: 98% (46/47) (p<0,001, tendência linear). Com relação ao HSV-2: grupo sem lesão no colo do útero: 27% (12/45), LIE-BG: 58% (22/38), LIE-AG: 78% (35/45) e câncer: 59% (29/49) (p<0,001, tendência linear). Foi observado aumento na proporção de reatividade para os dois marcadores entre os grupos controle, LIE-BG, LIE-AG e câncer do colo do útero (p<0,001). Não houve diferença significativa, quando comparamos apenas os grupos LIE-BG e LIE-AG entre si. CONCLUSÕES: FOI VErificado um aumento progressivo nas taxas de reatividade aos marcadores de imunohistoquímica estudados, com a severidade das lesões.

PURPOSE: to demonstrate the expression of biomarkers, detected by immunohistochemical techniques in healthy tissues, as well as in preneoplastic and neoplastic lesions of the uterine cervix. METHODS: in order to evaluate the immunohistochemical reactivity of tissues from the uterine cervix to p16 and to type 2 herpes simplex virus (HSV-2), 187 samples of low-grade intraepithelial lesions (LG-IEL) and high-grade intraepithelial lesions (HG-IEL), and of uterine cervix carcinoma were compared with a group of patients without uterine cervix lesions. Statistical analysis was done by the chi2 test for trends. The significance level was alpha=0.05. RESULTS: the reactivity to p16 was assessed showing the following distribution: group without uterine cervix lesions: 56% (24/43), LG-IEL: 92% (43/47), HG-IEL: 94% (43/46), and cancer: 98% (46/47) (p<0.001, linear trend). Concerning the HSV-2: group without uterine cervix lesions: 27% (12/45), LG-IEL: 58% (22/38), HG-IEL: 78% (35/45), and cancer: 59 % (29/49) (p<0.001, linear trend). There was an increase in the reactivity ratio for the two markers in the pathological groups (LG-IEL, HG-IEL and uterine cervix cancer, at p<0.001) compared to controls. There was no significant difference between the LG-IEL and the HG-IEL groups. CONCLUSIONS: a progressive increase of reactivity ratios of the studied immunohistochemical markers as a function of lesion severity was observed.

OBJETIVO: Avaliar o uso a longo prazo do flavonóide quercetina em ratos cirróticos por ligadura de ducto biliar comum (LDB). MÉTODOS: Foram utilizados 32 ratos machos Wistar, sendo submetidos à LDB ou simulação, e distribuídos em 4 grupos: 1) controle, 2) cirróticos, 3) cirróticos tratados com quercetina 50mg/kg, intraperitonealmente, desde o segundo dia após o procedimento cirúrgico; e 4) cirróticos tratados após o décimo quarto dia do procedimento cirúrgico. Analisou-se a função hepática por meio de testes bioquímicos (BT e BD) e atividade enzimática (ALT, AST, FA e GGT). Na análise anatomopatológica, utilizou-se a coloração de Hematoxilina & Eosina (H&E) e de Picrosírius para fibrose. A análise estatística para avaliação de sobrevivência foi realizada pelo teste Kaplan-Meier. RESULTADOS: Os resultados de sobrevivência dos oito animais de cada grupo foram: Grupo 1 = 200 dias de sobrevivência; Grupo 2 = 46 dias; Grupo 3 = 71 dias; e o Grupo 4 = 90 dias. Nos animais com ligadura de ducto biliar comum houve aumento das provas de função hepática e enzimáticas que se reduziu hipoteticamente com o tratamento com quercetina. Foram identificadas cirrose, congestão vascular porta e centrolobular na análise histopatológica por H&E e Picrosírius. CONCLUSÃO: O uso da quercetina diminuiu de maneira significante as alterações bioquímicas provocadas pela cirrose, aumentando o tempo de sobrevivência dos animais com cirrose biliar secundária à LDB, como verificado pelo teste de análise de sobrevivência.

PURPOSE: The long term use of quercetin flavonoid was evaluated in cirrhotic rats by common biliary duct bondage (LDB). METHODS: 32 male Wistar rats were submitted to LDB or simulation, and distributed in 4 groups: 1) control, 2) cirrhotic, 3) cirrhotic treated with quercetin the second day after the surgical procedure; and 4) cirrhotic treated with quercetin after the fourteenth day of the surgical procedure. The hepatic function was analyzed through biochemical tests (TB and DB) and enzymatic activity (ALT, AST, AP and GGT). In the anatomopatological analysis, Hematoxilin & Eosin (H&E) coloration, and Picrosirius (for fibrosis) were used.The statistical analysis for survival evaluation was accomplished by the Kaplan-Meier test. RESULTS: The results of survival of the eight animals of each group were: Group 1 = 200 days of survival; Group 2 = 46 days; Group 3 = 71 days; and the Group 4 = 90 days. In the animals with bondage of common biliary duct, there was an increase of the hepatic and anzymatic function tests, which was reduced with the treatment with quercetin. Cirrhosis, portal and centrolobular vascular congestion, were identified in the histopatological analysis with H&E and Picrosirius. CONCLUSION: The use of quercetin decreased significantly the biochemical alterations caused by cirrhosis, increasing the time of survival of the animals with secondary biliary cirrhosis due to LDB.

Racional - Administração a longo prazo de tetracloreto de carbono é modelo experimental para produzir fibrose hepática. O estresse oxidativo parece ser o mecanismo envolvido na hepatoxicidade por tetracloreto de carbono, onde as espécies ativas de oxigênio têm importante papel na patogênese da fibrose hepática. Objetivos - Avaliar a eficácia de um modelo experimental de cirrose hepática induzida pela inalação de tetracloreto de carbono em ratos, bem como avaliar a peroxidação lipídica e as características do líquido de ascite neste modelo. Material e Métodos - Inicialmente, acompanhou-se a evolução dos achados histológicos, através da técnica de hematoxilina e eosina, mediante o uso de tetracloreto de carbono inalatório ao longo das diferentes semanas (5ª, 7ª, 9ª, 12ª). Posteriormente, ao final da 15ª semana de estudo, os ratos, então divididos em três grupos (controle; controle + fenobarbital; e tetracloreto de carbono + fenobarbital), foram avaliados em sua histologia hepática, peroxidação lipídica e as características do líquido de ascite. Para as análises de peroxidação lipídica utilizaram-se as técnicas de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico e de quimiluminescência. No líquido de ascite avaliaram-se a citologia e a bacteriologia. Resultados - Observou-se entre a 12ª e 15ª semanas de inalação o estabelecimento de cirrose em 100% dos animais submetidos a inalação com tetracloreto de carbono, acompanhada de um aumento significante na peroxidação lipídica no fígado dos ratos inalados com tetracloreto de carbono. Evidenciou-se a presença de infecção do líquido de ascite em um dos sete casos nos quais esta estava presente. Conclusão - O método inalatório desenvolvido é eficaz na indução de cirrose hepática e formação de ascite, sendo o estresse oxidativo um dos principais mecanismos da indução de cirrose pelo tetracloreto de carbono.

Background -- Long-term administration of carbon tetrachloride is an accepted experimental model to produce hepatic fibrosis. Oxidative stress has been postulated as a major molecular mechanism involved in carbon tetrachloride hepatotoxicity, where the reactive oxigen species play an important role in the pathogenesis of liver fibrosis. Aims - This study was conducted to evaluate the effectiveness of an experimental model of hepatic cirrhosis induced by carbon tetrachloride inhalation as well as the importance of lipid peroxidation and the characteristics of the ascitic fluid in this model. Methods - At first the hepatic histologic findings were assessed using the hematoxilin-eosin technique in different moments of carbon tetrachloride inhalation (5th, 7th, 9th, 12nd weeks). Later, at the end of 15 weeks of the study the rats were divided in three groups (control; control + phenobarbital; and carbon tetrachloride + phenobarbital) for lipid peroxidation, ascitic fluid and hystologic characteristics evaluation. For the lipid peroxidation analysis, thiobarbituric acid and QL techniques were used. Citologic and bacteriologic parameters were analysed in the ascitic fluid. Results - Cirrhosis was established in 100% of carbon tetrachloride rats between the 12nd and 15th weeks with an elevation in the lipid peroxidation carbon tetrachloride rats' livers. Ascitic fluid infection was observed in one of seven rats who has developed ascitis. Conclusions - The carbon tetrachloride inhalation method developed in this study is effective in cirrhosis induction and ascitis formation, and the carbon tetrachloride cirrhosis physiopathogenesis is probably related to the oxidative stress instalation.

OBJETIVO: As espécies ativas de oxigênio (EAO), originadas pela ação da enzima xantina-oxidase, têm importância na fisiopatologia da síndrome isquêmica-reperfusional. Foi nosso objetivo verificar o possível efeito citoprotetor do alopurinol (inibidor da xantina-oxidase) sobre as alterações histológicas decorrentes da isquemia-reperfusão hepática. MÉTODOS: Utilizaram-se 60 ratos Wistar assim divididos: grupo 1(n=20): pré-tratado com alopurinol e submetido à laparotomia e à exposição do pedículo hepático por 45 min.; grupo 2 (n=20): tratado com alopurinol e submetido à isquemia hepática seletiva por 45 min.; e grupo 3 (n=20): submetido apenas à isquemia por 45 min. A cada 24 horas, durante quatro dias, cinco animais de cada grupo foram submetidos a hepatectomias parciais para estudo histopatológico. RESULTADOS: Na análise das 24h, houve aumento significativo da congestão vascular e da necrose nos grupos de animais submetidos à isquemia (2 e 3) quando comparados aos do grupo controle (grupo 1) (p<0,05). Na análise das 48h, os resultados se repetiram em relação à necrose hepática. Não se observaram diferenças significativas nos tempos de 72 e 96h. Além disso, no período das 24h, verificou-se uma diminuição significativa da necrose nos animais submetidos à isquemia e pré-tratados com alopurinol quando comparados ao grupo não tratado. CONCLUSÕES: A isquemia transitória normotérmica hepática causa significativas alterações histopatológicas nos fígados de ratos. Em nosso estudo, o alopurinol exerceu efeito benéfico em relação à necrose hepatocitária, o que reforça o envolvimento da enzima xantina oxidase no dano decorrente da isquemia-reperfusão hepática.

OBJECTIVE: Reactive oxygen species (ROS), origined from the xanthine oxidase activity, have great importance in the ischemia-reperfusion syndrome. Our objective was study the effect of allopurinol (a xanthine oxidase inhibitor) on the histologic alterations in ischemic livers in rats. METHODS: Sixty Wistar rats were utilized and dividided into three groups: Group 1 (n=20): pretreated with allopurinol and submitted to laparatomy and exposition of the hepatic pedicle for 45 minutes; Group 2 (n=20): pretreated with allopurinol and submitted to hepatic ischemia for 45 minutes; and Group 3 (n=20): submitted to hepatic ischemia for 45 minutes. To every 24 hours, during four days, five rats of every group were submitted to partial hepatectomy to study the liver histology. RESULTS: In the analysis of 24h, vascular congestion and hepatic necrosis significantly increase in the ischemic groups (2 and 3) when compared with group 1 (p<0,05). In the 48h, the results repeated in relation to necrosis. We didn’t observe significative difference in the histologic alterations between the groups in the 72 and 96h after the proceedings. Furthermore, in the 24h, we observed a significative decrease of hepatic necrosis on the pretreated ischemic rats when compared with no-treated animals. CONCLUSIONS: The transitory normotermic hepatic ischemia causes significative histopathologic alterations in the livers of rats. In this study, allopurinol exerted a beneficial effect on the hepatic necrosis, emphatyzing the importance of the xanthine oxidase enzyme in the damage induced by hepatic ischemia-reperfusion.